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甲基化實驗外包,請認準維伯鑫生物科技!

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背景知識:

 

DNA甲基化是最早發現的DNA修飾途徑之一,大量研究表明,DNA甲基化能引起染色質結構、DNA構象、DNA穩定性及DNA與蛋白質相互作用方式的改變,從而控制基因表達。DNA甲基化主要形成5-甲基胞嘧啶(5-mC)和少量的N6-甲基嘌呤(N6-mA)及7-甲基鳥嘌呤(7-mG)。結構基因含有很多CpG結構,2CpG2GpC中兩個胞嘧啶的5位碳原子通常被甲基化,且兩個甲基集團在DNA雙鏈大溝中呈特定三維結構。基因組中60% 90%CpG都被甲基化,未甲基化的CpG成簇地組成CpG島,位于結構基因啟動子的核心序列和轉錄起始點。DNA的甲基化修飾是基因表達調控的一種重要手段。

 

 

 

主要檢測方法及原理:

 

亞硫酸氫鈉測序法   Bisulfite Genomic Sequencing PCRBSP

 

亞硫酸氫鈉測序法是建立在MSP基礎上進一步深入研究CpG島各個位點甲基化情況的方法。重亞硫酸鹽使DNA中未發生甲基化的胞嘧啶脫氨基轉變成尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶保持不變,行PCR擴增(引物設計時盡量避免有CpG,以免受甲基化因素的影響)所需片段,則尿嘧啶全部轉化成胸腺嘧啶。最后,對PCR產物進行測序,并且與未經處理的序列比較,判斷是否CpG位點發生甲基化。

 

BSP檢測流程圖

 

技術優勢:此方法一種可靠性及精確度很高的方法,能明確目的片段中每一個CpG位點的甲基化狀態。在尋找有意義的關鍵性CpG位點上,有其他方法無法比擬的優點。限制性:每次至多能夠檢測450 bp內的基因甲基化狀態。

 

甲基化特異性的PCR     Methylation Specific PCRMSP

 

甲基化特異性是一種特異位點甲基化檢測技術。其基本原理是用亞硫酸氫鈉處理基因組DNA,未甲基化的胞嘧啶變成尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶不變。因此從理論上講,用不同的引物做PCR,即可檢測出這種差異,從而確定基因有無CpG島甲基化。

 

MSP檢測流程圖

 

MSP檢測結果

 

    技術優勢:這是檢測基因甲基化的經典方法,是一種簡便的、特異的、敏感的檢測單基因甲基化的方法。可以用于高通量樣品基因特異位點甲基化的檢測。限制性:因采用甲基化特異性引物進行PCR,該方法一次只能檢測一個位點。

 

樣品準備條件:

細胞樣品:收集細胞后放入液氮中速凍保存或速凍24 h后轉入-80 °C冰箱保存。

組織樣品:動物組織一般取材后立即放入液氮中速凍保存,液氮凍存24 h后可轉入-80 °C冰箱保存。特殊組織(植物等)建議直接進行甲基化檢測實驗。

所有樣品的處理和保存過程中,切忌反復凍融。

   樣品運輸條件:樣品運輸條件根據實驗樣品的處理條件,可以選擇液氮或者干冰運輸。

 

您只需提供:

 

新鮮且足量的樣品(組織不少于50 mg,細胞不少于107,全血不少于500 μl),或純化好的符合實驗要求的DNA≥ 5 μg/樣),檢測的基因信息,相關文獻等。

 

我們提供:

 

實驗報告單,MSP電泳圖/BSP測序圖等。

 

關于維伯鑫

 

維伯鑫生物依靠自身完善的實驗平臺和專業的實驗技術團隊,多年來用心深耕科研協作市場,積累了豐富的課題實驗經驗,有效的幫助科研工作者縮短試驗周期、節省實驗成本,市場口碑極佳。我們承諾為客戶提供規范、周到的實驗技術服務,尊重客觀事實,保證提供的實驗數據真實性與可溯源性。我司擁有數十位博士碩士專業人才,確保全程解決方案優化調整及實驗質控,專業化的實驗人員為實驗操作流程的規范性和實驗結果的準確性提供保證。協助了數百項國家自然科學基金重大項目、面上、地區、青年項目及各省科技項目等,為廣大客戶提供了優質的綜合解決方案


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